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化學發光分析儀發光酶免疫分析法

時間:2021-11-02 點擊次數:379
  化學發光分析又稱化學發光免疫分析(CLIA),是用化學發光劑直接標記抗原或抗體的免疫分析方法。常用于標記的化學發光物質有吖啶酯類化合物——acridinium ester(AE),是有效的發光標記物,其通過起動發光試劑作用而發光,強烈的直接發光在一秒鐘內完成,為快速的閃爍發光。吖啶酯作為標記物用于免疫分析,其化學反應簡單、快速、無須催化劑;檢測小分子抗原采用競爭法,大分子抗原則采用夾心法,非特異性結合少,本底低;與大分子的結合不會減小所產生的光量,從而增加靈敏度。
  化學發光分析儀發光酶免疫分析法:
  從標記免疫分析角度,化學發光酶免疫分析(chemi luminescent enzyme immuno assay,CLEIA ),應屬酶免疫分析,只是酶反應的底物是發光劑,操作步驟與酶免分析完全相同:以酶標記生物活性物質(如酶標記的抗原或抗體)進行免疫反應,免疫反應復合物上的酶再作用于發光底物,在信號試劑作用下發光,用發光信號測定儀進行發光測定。目前常用的標記酶為辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP),它們有各自的發光底物。
  發光試劑
  HRP標記的CLEIA常用的底物為魯米諾(32氨基鄰苯二甲酰肼,luminol),或其衍生物如異魯米諾(42氨基鄰苯二甲酰肼),是一類重要的發光試劑。魯米諾的氧化反應在堿性緩沖液中進行,在過氧化物酶及活性氧存在下,生成激發態中間體,當其回到基態時發光,其波長為425nm。
  早期用魯米諾直接標記抗原(或抗體),但標記后發光強度降低而使靈敏度受到影響。近來用過氧化物酶標記抗體,進行免疫反應后利用魯米諾作為發光底物,在過氧化物酶和起動發光試劑作用下,魯米諾發光,發光強度依賴于酶免疫反應物中酶的濃度。

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